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    超凈工作臺在細胞培養(yǎng)實驗中的應(yīng)用

    點擊次數(shù):1599 更新時間:2021-12-03

    植物(plant)組織具有無限增殖和產(chǎn)生不定芽、不定根的能力。凈化工作臺的原理:潔凈環(huán)境是在特定的空間內(nèi),潔凈空氣(進濾空氣)按設(shè)定的方向流動而形成的。以氣流方向來分,現(xiàn)有的超凈工作臺可分為垂直式,由內(nèi)向外式以及側(cè)向式。在培養(yǎng)條件(tiáo jiàn)適宜時,只要通過一個超凈工作臺,以及用一個芽可以培養(yǎng)出許多植株來。其在保持優(yōu)良砧木及品種種性、進行工廠化育苗方面具有很好的意義。
     
    超凈工作臺在細胞培養(yǎng)實驗中的應(yīng)用方法步驟(procedure)如下:
     
       
      一、外植體接種與材料(Material)消毒(disinfection)
       取田間當年生新梢或一年生枝蔓,去葉,用肥皂水將表面(appearance)刷洗,并用自來水沖洗干凈,剪成一芽一段,放入干凈燒杯,拿進超凈工作(gōng zuò)臺;先用70%酒精過一下,無菌(fungus)水(用高壓鍋,在120℃下,滅菌30分鐘的水)沖洗3遍;再用0.1%液消毒(disinfection)5~10分鐘,無菌水沖洗3遍;然后用酒精燈(Alcohol lamp)火焰消毒過的工具(鑷子、剪刀、撥針、解剖刀等)剝?nèi)[片、葉柄,取出帶數(shù)個葉原基的幼芽接入培養(yǎng)基,半包埋。
     
       培養(yǎng)基配好后裝入廣口的罐頭瓶、三角瓶或試管,裝入量為1~2厘米高。凈化工作臺用途:廣泛適用于藥衛(wèi)生、生物制藥、食品、學(xué)科學(xué)實驗、光學(xué)、電子、無菌室實驗、無菌微生物檢驗、植物組培接種等需要局部潔凈無菌工作環(huán)境的科研和生產(chǎn)部門。也可連接成裝配生產(chǎn)線具有低噪聲、可移動性等優(yōu)點。120℃滅菌(Sterilization)(fungus)30分鐘后備用。
     
       外植體接種后放到培養(yǎng)室的培養(yǎng)架上培養(yǎng)。培養(yǎng)條件(tiáo jiàn)為:光照1000勒克斯,8~10個小時,暗14~16小時;溫度(temperature)25~28℃。培養(yǎng)1~2周,即可看出是否消毒(disinfection)*,有無感染。及時巡查,將未感染的外植體轉(zhuǎn)接到新的培養(yǎng)瓶內(nèi),丟棄已感染的外植體。
     
       
      二、繼代繁殖
       上述接入的外植體培養(yǎng)1~2個月,即可長到2~3厘米長。在超凈工作(gōng zuò)臺上,將其剪成約1厘米長莖段,接種到新的培養(yǎng)基中(培養(yǎng)基的配方同上)。剪莖段時所用工具和培養(yǎng)皿(或牛皮紙)都要經(jīng)過消毒,消毒方法分別同上述酒精(術(shù)語稱乙醇)燈消毒法和高壓消毒法。
     
       其后,大約每25天左右進行一次繼代培養(yǎng)。每次的莖段增殖量約為3~4倍。反復(fù)進行,直到所需數(shù)量。
     
       
      三、生根
       上述培養(yǎng)的莖段長到2厘米以上時,即可用于生根。生根培養(yǎng)基的成分為上述培養(yǎng)基的大量元素減半,除激素和蔗糖外,其他成分不變。
     
       生根培養(yǎng)基配好后也需高壓滅菌(120℃,30分鐘)后使用。
     
       生根培養(yǎng)20天左右,莖段上即可長出根,成為完整苗。生根苗長到3~5厘米長時即可鍛煉、移栽。
     
       
      四、生根苗的鍛煉、移栽
       (一)鍛煉
     
       組培苗在人工培養(yǎng)條件(tiáo jiàn)下長期生長,對自然生長環(huán)境(environment)的適應(yīng)性減弱。超凈工作臺是為了適應(yīng)現(xiàn)代化工業(yè)、光電產(chǎn)業(yè)、生物制藥以及科研試驗等*域?qū)植抗ぷ鲄^(qū)域潔凈度的需求而設(shè)計的。移栽前需要一個過渡階段,即鍛煉。鍛煉方法(method)為:將培養(yǎng)瓶移**自然光照下2~3天,打開瓶口2~3天,再移栽。
     
       (二)移栽
     
       移栽時先洗凈根上培養(yǎng)基,避免(avoid)培養(yǎng)基感染雜菌(fungus)致苗死亡。移栽方法及灌水、遮陽等管理同實生苗移栽。但注意(attention)組培苗比較嬌嫩,需輕盈操作。
     
       
      五、工廠化育苗
     
    將上述培養(yǎng)基制備及超凈工作臺相關(guān)(related)、裝瓶、消毒(disinfection)、無菌(fungus)苗增殖、生根、鍛煉、移栽等過程全部放在實驗(experiment)室和溫室中進行,即為工廠化育苗。目前,這樣的生產(chǎn)線已在意大利和法G投入使用。但外植體接種尚需人工操作。

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